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产品规格：1mL（200T） 

储存条件：4℃避光冷藏，请勿冻存。本产品在推荐条件下可以储存 6 个月。

光谱特性：Annexin V-PE: Ex/Em = 488/578 nm

产品介绍 

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸( PS )从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V 具有易于结合 到磷脂类如PS 的特性，对PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。 

Annexin V-PE 可以与7-AAD/PI等联合使用，来检测细 胞凋亡情况。7-AAD/PI 可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-PE 和7-AAD结合染色呈现双阳性，从而来区分活细胞、早调细胞与晚凋细胞。

使用方法 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品，作为阴性对照。此外，设定一组样品做单染，用于调节补偿。 

2. 沉淀细胞 悬浮细胞：1000 rpm，4 ℃离心 5 min 沉淀细胞；贴壁细胞：用不含 EDTA 的胰酶消化细胞， 1000 rpm ，4 ℃离心 5 min 沉淀细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 μL 左右的培养液，以避免吸走 细胞。

注：用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养 基中恢复约30分钟，然后在染色。 胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜，允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上，从而导致假阳性染色。

3. 加入约1mL 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度1-5×10^6/mL （缓冲液可选择终浓度为 2mM Hepes/NaOH, pH7.4，28mM NaCl，0.5mM CaCl2溶液）。 

5. 取100 μL 的细胞悬液于5mL流式管中，加入5μL Annexin V-PE 混匀后于室温避光孵育5分钟。 

6. 加入10μL 20μg/mL的7-AAD或PI，并加400 μL PBS，立刻进行流式检测。

注意事项： 

1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。