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产品简介： Hoechst 33342，也称 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光 染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流 式细胞仪检测。Hoechst 33342 也常用于普通的细胞核染色，或常规的 DNA 染色。Hoechst 33342 的 最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33342 和双链 DNA 结合后，最大激发波 长为 350nm，最大发射波长为 461nm。本 Hoechst 33342 染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞 核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。 

使用说明： 使用前用生理盐水或 PBS 将 Hoechst 33342 染色液稀释 100 倍，即为工作液。 

1. 对于固定的细胞或组织： 

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342 染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33342 染色。 

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33342 工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品 3 倍体积的工作液，混匀。室温放置 3-5 分钟。 ;

c. 吸除 Hoechst 33342 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的 细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 

2. 对于活细胞或组织： 

a. 加入适当量 Hoechst 33342 工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入 1mL 工作液，对于 96 孔板一个孔需加入 100μL 工作液。 

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养 20-30 分钟。弃染色液，用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可进行荧光检测。

注意事项： 

荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。

建议染色后尽量 当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。 

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。